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固拓生物|多肽常用的几种水解方法与步骤

作者:andy       发布时间:2022-01-08       

虽然多肽合成的氨基酸组成分析方法较多,且趋向更灵敏、更精确、更简便、更快速,但还没有一种方法可以单独适用于所有氨基酸残基的检测,并且很多因素如温度、时间、水解试剂、水解方法及多肽合成样品中添加剂等对水解程度均有影响。常用的水解方法作简要介绍如下: 

01酸水溶解

酸性水解是应用最为广泛水解方法,可以使大多数氨基酸残基完全水解,最通用的水解剂是6 mol/L HCI。

条件:6 mol/L HCI、真空、110.水解时间为20-24h。即可用于液相水解模式也可用于气相水解模式。但在该条件下,天冬酰胺和谷氨酰胺分别被完全水解为天冬氨酸和谷氨酸,色氨酸则被完全破坏,半胱氨酸先用二硫代二丙酸、4一乙烯呲啶或碘代乙酸保护后水解方可测定,酷氨酸部分被水解液所破坏,丝氨酸和苏氨酸被部分水解。有些脂肪族氨基酸残基间的肽键难于裂解,可以通过延长水解时间如水解92h甚至120h来解决。

固拓生物|多肽常用的几种水解方法与步骤

02碱性水解

碱性水解一般选用NaOH和KOH作为水解剂。该水解方法是HCI水解的互补法。因为碱水解时,多数氨基酸遭到破坏或外消旋化,仅色氨酸是稳定的。所以此法仅限于测定色氨酸。

03酶水解

用一组蛋白酶水解肽链,特别适用于对化学水解敏感的氨基酸如天冬酰胺和谷氨酰胺的测定。水解过程中氨基酸不发生消旋化,几乎可以保持所有的组成氨基酸不被破坏。但是因为酶水解条件温和,对天冬酰胺、谷氨酰胺等皆无破坏作用,且反应需要较长的时间,水解不完全,酶本身也是蛋白质,对样品的测定结果可能会有干扰。

微波辐射能水解,一般情况下190℃微波水解15分钟肽类即可完全水解,导致完全水解的时间大大缩短。在微波辅助酸水解和微波辅助酶水解中,水解时间可从过去的几十小时缩短到几十分钟。

总之,多肽合成药物水解方式应根据其产品的性质、研究目的、可获得的样品量及少实验室的具体条件采取适宜的水解方法。

 

写到最后

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