多肽干货|一文捋清「多肽」的常见问题

1、一般对于多肽的书写方式规范是什么样的呢？多肽序列书写规则知识科普

多肽是由氨基酸通过肽键连接形成的链状分子，其序列书写有严格规范：1. 采用单字母或三字母缩写形式；2. 必须将N端（氨基端）写在左侧，C端（羧基端）写在右侧，这是国际统一规定。假如序列为YTIWMPENPRPGTTNSRGKRASNG已是正确的单字母书写形式，其中每个字母代表一种氨基酸（如Y代表酪氨酸，T代表苏氨酸等）。在科研文献中，这种从左(N端)到右(C端)的书写方向必须严格遵守，以避免序列解读错误。

若序列ytiwmpenprpgttnsrgkrasng,氨基酸都属于D型氨基酸（D型氨基酸是L型氨基酸的镜像异构体（对映体），其分子结构中的α-碳原子手性中心构型与天然L型相反），价格一般是L型氨基酸的1.3倍。（报价是对应L型氨基酸的）

2、多肽标记生物素Biotin（几乎所有的修饰物） 的方法

标记分为三个位置，N端，肽段中，C端，
N端能够修饰很多标记物，如：Biotin,FAM ,FITC 等等，直接写法如：Biotin-CRGDSFG
肽段中和C端修饰标记物，如：Biotin,FAM ,FITC 等等，直接写法如：CRGDK（Biotin）SFG，需要添加特殊的氨基酸K来引入修饰标记物。而且一般都是在合成多肽的序列时，直接合成K（Biotin），K（Biotin）是采购得来的，Fmoc-Lys(Biotin)-OH
3、我的肽纯度是98%，那么，其余的2%都是些什么物质？是什么原因造成的？

多肽的纯度通常是通过HPLC来制备的。合成过程中，氨基酸之间的交联效率不是总能达到100%，因而产生一系列的氨基酸缺失的杂志。大多数这样的氨基酸缺失的杂质在纯化的过程中都被去掉了，但有少数的杂质其色谱表现与目标多肽很接近。这些氨基酸缺失的杂质肽留在了多肽样品中就构成了余下的几个百分点，2%的主要包括杂肽，水，TFA切割盐。
4、多肽的净含量是什么？和多肽纯度有什么区别？

肽的净含量是指样品中肽类物质相对于非肽类物质所占的百分比，冻干多肽的重量重不仅仅包含多肽，还包含有一些非肽的组分，如水，被吸收的溶剂和盐等。纯度通常是由HPLC决定的，纯度定义的是多肽样品中含正确序列的组分的百分比，而肽的净含量通常是用氨基酸组分分析或紫外分光法测定的。

5、对不同的实验，如何选择肽的纯度？

肽的纯度是很重要的指标，纯度的选择取决于实验的目的。对不太灵敏的筛选实验，建议使用粗品或>75%；对免疫级别，建议选用>85%；对于受体与LIGAND相互作用的研究，生物ASSAY研究，或细胞水平的研究，建议>95%；对于结构研究，建议98%。

6、如何正确溶解多肽？

在多肽溶解之前，建议您先用少量肽来实验最适溶解方法（一般添加不影响实验的有机溶剂），只有当多肽完全溶解后，才能加入水或缓冲液将之稀释至最终浓度。

7、如何溶解易溶解性多肽？

多肽首先选择溶解在灭菌的蒸馏水或者去离子水中。

8、如何溶解疏水性多肽？

DMF或者DMSO的使用有助于多肽的溶解，这是通过破坏多肽二级结构而助溶。这种试剂的使用可能会对其生物活性及后续的研究工作造成干扰，请您在溶解的时候，考虑到这个问题，可以尝试使用其他的有机溶剂。
9、多肽贴壁是什么？怎么处理这种情况？

这是由于多肽序列中，亲水性氨基酸比较多，比较容易吸潮，吸收管子里空气中的水分导致贴壁现象，常见于一些易溶解的小短肽上。
10、我们常见的荧光修饰有哪些？

黄绿色荧光如FITC ，黄色的FAM，红色的罗丹明

11、收到多肽产品后，该如何保存呢？

冻干粉末状多肽一般是非常稳定的，在常温下1周是不会有任何问题的（非常不稳定的多肽除外），收到后放在-20或-80度冰箱保存，液体的多肽建议尽快用掉。

12、为什么含有Cys，Met或Trp的多肽难合成？

含有Cys, Met或Trp 的多肽难以合成，同时难以获得高纯度的产品。主要因为这些基团不稳定，易氧化。这些多肽的使用和储存都需要特别注意，避免反复开启盖子。
13、含有Cys的多肽在出货前经过还原了吗？

如果没有发现肽已经被氧化，我们一般不对Cys进行还原。所有的多肽都是有粗品在PH2条件下纯化、冻干后得到的，这样的pH条件至少在某种程度上防止了Cys的氧化。含Cys的肽一般在pH2条件下进行纯化，除非有特殊原因需要在pH6.8条件下纯化。如果纯化在pH6.8进行，纯化产物必须马上用酸处理以防氧化。在最后的质量控制环节，对于含有Cys的肽，如果MS图谱上发现有分子量为（2P+H）的物质存在，说明已经形成二聚体。如果MS和HPLC都没有问题，就可以直接冻干后出货。无须再做任何处理。需要指明的是，含有Cys的肽随着时间的推移会发生缓慢的氧化，氧化程度主要取决于肽序列及储存条件。

14、多肽的使用和保存方法

使用：对于不好溶解的多肽，先建议使用超声波助溶或者先用尽量少的DMSO溶解后，再用水稀释。
保存：收到多肽后长期保存需要在-20度，或者-80度的冰箱保存，不用时最好不要打开，多肽溶解后一定要低温保存，并且在4周内用完。
15、是否提供报告？有哪些报告？

COA（分析报告）、HPLC（高效液相色谱）、MS（质谱），目前多肽行业只有这三种标准，没有出其他的标准。

16、多肽合成周期是多久？

一般2-3周，如果合成比较难的话，或者序列比较长，可能时间会长一点。

17、为什么偶联的多肽这么难溶？

请问是做什么实验，如果是免疫，告诉客户，偶联产物的溶解性与偶联的效率有关，请问你是希望偶联效率低点呢？还是希望高点，偶联效率低的就好溶，偶联效率高的就不好溶，这是正常现象，如果是打动物，没有必要溶解的太好，有絮状的也可以打动物的，不会有任何影响，如果担心有影响，可以发液体的，就是偶联后不再冻干了。

18、不知道需要多少纯度的多肽，能够帮忙推荐一下呢？

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