背景技术

卡格列肽(Cagrilintide) 是一种新型长效酰化胰淀素类似物，作为非选择性胰淀素受体（AMYR）和降钙素G蛋白偶联受体（CTR）激动剂，是由38个氨基酸组成的环状多肽，序列中含有38个氨基酸，并且含有一对二硫键。卡格列肽可显著减轻体重，减少食物摄入，在肥胖研究中具有潜力。胰淀素(amylin)是GLP-1信号通路以外，另一种与饥饿和饱腹感相关的激素。

卡格列肽能够减少能量摄入，调节食物选择和偏好，其与胰岛素共同分泌而发挥葡萄糖调节作用，抑制餐后胰高血糖素释放，并延迟胃排空。在治疗糖尿病，肥胖症，代谢综合症以及心血管疾病等方面具有明显的优势，需求应用前景广泛。

卡格列肽化学结构式

基本信息

中文名称：卡格列肽

英文名称：Cagrilintide

公司编号：GT-F064

CAS号：1415456-99-3

序列：γ-Glu-Lys-Cys-Asn-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Glu-Phe-Leu-Arg-His-Ser-Ser-Asn-Asn-Phe-Gly-Pro-Ile-Leu-Pro-Pro-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Asn-Thr-Pro-NH2(Disulfidebridge:cys4-cys9)

分子式：C194H312N54O59S2

分子量：4409.01

卡格列肽使用的原料

卡格列肽制备方法

根据卡格列肽的相关专利，可以得到卡格列肽的合成方法。采用选取卡格列肽序列的第7-8位氨基酸作为伪脯二肽Fmoc-Ala-Thr(pro-me-me)-OH,序列的第10-11位氨基酸作为伪脯二肽Fmoc-Ala-Thr(pro-me-me)-OH,序列的第21-22位氨基酸作为伪脯二肽Fmoc-Ser-Ser(pro-me-me)-OH;其余位点按照氨基酸序列进行偶联反应;肽树脂经裂解得到卡格列肽线性肽;再经过液相环化得到卡格列肽粗品，经纯化制备、转盐、浓缩、冻干得到卡格列肽精肽。该方法使用了三个伪辅二肽进行偶联,虽然解决了因树脂缩聚而导致的偶联难度增大的问题,但增加了生产成本,且该工艺制备所得精肽纯度较低,未达到原料药的质量要求。

卡格列肽制备图

（1）卡格列肽肽树脂的制备

取1 .5mmol第1个保护氨基酸和1 .5mmol HOBT，用适量DMF溶解并冷却至0~15℃；另取1 .5mmol DIC，搅拌下慢慢加入至保护氨基酸DMF溶液中，于0~15℃环境中搅拌反应10分钟，得到活化后的保护氨基酸溶液，备用。

取0.5 mmol的氨基树脂(取代度0.42mmol/g)，采用DMF溶液溶胀60分钟，使用20% Pip/DMF溶液去保护30min，洗涤过滤得到待反应的树脂。

将活化后的第1个保护氨基酸溶液加入到待反应的树脂中，于25~35℃条件下偶联反应120～300分钟，过滤洗涤，得含1个保护氨基酸的树脂：Fmoc-Pro-Resin。

采用上述同样方法，依次接入上述对应的第2～38个保护氨基酸或片段：Fmoc- Thr(tBu)-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Val-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Pro-OH·H2O，Fmoc-Pro-OH·H2O，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Ile-OH，Fmoc-Pro-OH·H2O，Fmoc-Phe-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Pro-OH·H2O，Fmoc-Glu(OtBu)-OH，Fmoc-Ala-OH·H2O，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH，Fmoc-Gln(Trt)-OH，Fmoc-Ala-Thr(psi(Me,Me)pro)-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Ala-Thr(psi(Me,Me)pro)-OH，Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Glu-OtBu，二十烷二酸单叔丁酯，得卡格列肽肽树脂4.98g。

（2）卡格列肽线性肽粗肽的制备

取卡格列肽肽树脂4.49g，加入TFA混合溶液，混合溶液配比为TFA:EDT/Tis/苯酚/ H2O=87 .5:2.5:5:2.5:2.5，用量为8ml/克树脂；20~30℃搅拌反应3小时，反应混合物使用砂芯漏斗过滤，收集滤液，树脂再用少量TFA洗涤3次，合并滤液后加入MTBE沉淀，再用MTBE洗沉淀3次，抽干得类白色粉末即为卡格列肽线性肽粗肽2.08g。

（3）卡格列肽环肽粗肽溶液的制备

取卡格列肽线性肽粗肽0.50g，按浓度5.0mg/ml配置成线性肽粗肽溶液，在搅拌状态下滴加5ml DMSO溶液，20~30℃反应20h，得到卡格列肽环肽粗肽溶液。

（4）卡格列肽精肽的制备

取卡格列肽环肽粗肽溶液，用0.45μm混合微孔滤膜过滤；

采用高效液相色谱法进行纯化制备，收集卡格列肽馏分；

采用高效液相色谱法进行换盐，收集换盐主峰并用分析液相检测纯度，合并换盐主峰溶液，减压浓缩，得到卡格列肽醋酸水溶液，冷冻干燥，得卡格列肽精肽152.18mg，纯度为99.58％ ，最大单一杂质0.09％，总收率为31.87％，分子量为4409.0。

卡格列肽HPLC图

卡格列肽MS图

上述实施例表明，与逐步偶联的合成工艺相比，本发明提供的方法所得产品纯度大于99.0％，单一杂质均小于0.1％，提高了产品质量和总收率，工艺简单易于控制，工业化程度高，具有广泛的实用价值和应用前景。