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多肽疑难问题 |浓度,肽成分 ≠肽纯度

作者:andy       发布时间:2021-09-26       

怎样计算多肽的浓度?

肽纯度就是指目标序列占肽总产量的百分数。由于生成中肽键的产生并不是100%,因此最开始的肽非是全部的多肽链全是目标序列。有一些键很有可能无法生成,或是氨基酸很有可能无法准确地与一些链结合。由于多种原因产生的不正确序列,在化合物中占一定占比。杭州固拓生物应用反相高效液相色谱法结合质谱分析对粗肽开展分析和纯化,以得到需要的目标序列纯度。必须明白的是即便 是经过纯化以后,获得的产品也混有一小部分的非肽物质,比如盐。

多肽疑难问题 |浓度,肽成分 ≠肽纯度

肽被纯化和冻干后,一般获得的产品是白色粉状。白色肽粉将包括一些非肽成份,似水、消化吸收溶剂、反离子和盐。净肽成分包含最后产品中肽的真实重量百分数。这一数据在50%到90%中间转变,这在于纯度、生成和纯化的次序和方式。在预估用以生物分析或别的比较敏感肽试验的肽物质的量浓度时,必须考虑肽成分。肽浓度能够根据减去非肽重量来明确融解溶剂的容积。比如,当应用1mg最后产品做成1mg/ml肽成分为80%的水溶液时,您将应用800ul而不是1000ul的溶剂。

肽成分并不是肽纯度的指标值;杭州固拓生物提示:这也是二种测量方法。纯度由高效液相色谱法(HPLC)测定,并指示是不是存有含有不希望序列的污染肽。非肽的总成分与总肽成分不相干。根据氨基酸分析或紫外线分光光度法精确测定净肽成分。

依据冻干的重量难以明确具体的肽浓度。冻干肽可带有10-70%重量的水和盐。与疏水性肽对比,吸水性更强的肽一般带有大量的结合水和盐。

假如肽序列中有头发颜色团(W或Y残基),依据这种残基的消光系数能够便捷地明确肽浓度。

下列流程可用以测算:

在280nm中性化pH标准下达色残基的摩尔消光系数:

谷氨酸5560AU/mmole/ml

色氨酸1200AU/mmole/ml

肽序列中每一个头发颜色团的消光系数一般被觉得是加性的,即肽的总摩尔消光系数在于序列中这种同宗残基的类别和总数。

测算:mg肽/ml=A280xDFxMW/e,在其中A280是水溶液在1cm体细胞中280nm处的具体OD值,DF是稀释液因素,MW是肽的相对分子质量,e是每一个生色团在280nm处的摩尔消光系数

事例:在一个1公分的体细胞中,序列为grkkrqrrrppqqMW=1847)的肽的50倍稀释溶液在280nm处读值为0.5AU。测算肽贮备水溶液中的初始肽浓度:

Mg肽/ml=0.5AUx50x1847Mg/mmole/[1x5560+2x1200]AU/mmole/ml=5.8


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